Dėkojame, kad apsilankėte nature.com. Jūsų naudojama naršyklės versija turi ribotą CSS palaikymą. Kad patirtis būtų geriausia, rekomenduojame naudoti naujausią naršyklės versiją (arba išjungti suderinamumo režimą „Internet Explorer“). Be to, siekiant užtikrinti nuolatinį palaikymą, šioje svetainėje nebus stilių ar „JavaScript“.
Melaminas yra pripažintas maisto teršalas, kurio tam tikrose maisto kategorijose gali būti tiek atsitiktinai, tiek tyčia. Šio tyrimo tikslas buvo patikrinti melamino aptikimą ir kiekybinį nustatymą kūdikių mišiniuose ir pieno milteliuose. Iš viso buvo išanalizuota 40 komerciškai prieinamų maisto mėginių, įskaitant kūdikių mišinius ir pieno miltelius, iš skirtingų Irano regionų. Apytikslis melamino kiekis mėginiuose buvo nustatytas naudojant efektyviosios skysčių chromatografijos-ultravioletinės (HPLC-UV) sistemą. Buvo sudaryta kalibravimo kreivė (R2 = 0,9925) melamino aptikimui 0,1–1,2 μg ml−1 diapazone. Kiekybinio nustatymo ir aptikimo ribos buvo atitinkamai 1 μg ml−1 ir 3 μg ml−1. Melaminas buvo ištirtas kūdikių mišiniuose ir pieno milteliuose, ir rezultatai parodė, kad melamino kiekis kūdikių mišinių ir pieno miltelių mėginiuose buvo atitinkamai 0,001–0,095 mg kg−1 ir 0,001–0,004 mg kg−1. Šios vertės atitinka ES teisės aktus ir Maisto kodeksą. Svarbu pažymėti, kad šių pieno produktų su sumažintu melamino kiekiu vartojimas nekelia didelės rizikos vartotojų sveikatai. Tai patvirtina ir rizikos vertinimo rezultatai.
Melaminas yra organinis junginys, kurio molekulinė formulė C3H6N6, gaunamas iš cianamido. Jis labai mažai tirpsta vandenyje ir sudaro maždaug 66 % azoto. Melaminas yra plačiai naudojamas pramoninis junginys, turintis platų teisėtą panaudojimo spektrą plastikų, trąšų ir maisto perdirbimo įrangos (įskaitant maisto pakuotes ir virtuvės reikmenis) gamyboje1,2. Melaminas taip pat naudojamas kaip vaistų nešiklis ligoms gydyti. Didelė azoto dalis melamino sudėtyje gali lemti netinkamą junginio naudojimą ir baltymų molekulių savybių suteikimą maisto ingredientams3,4. Todėl į maisto produktus, įskaitant pieno produktus, įdedant melamino, padidėja azoto kiekis. Taigi buvo klaidingai padaryta išvada, kad pieno baltymų kiekis yra didesnis nei iš tikrųjų.
Kiekvienas pridėtas melamino gramas padidina maisto baltymų kiekį 0,4 %. Tačiau melaminas gerai tirpsta vandenyje ir gali sukelti rimtesnę žalą. Įdėjus 1,3 gramo melamino į skystus produktus, tokius kaip pienas, pieno baltymų kiekis gali padidėti 30 %5,6. Nors melaminas dedamas į gyvūninės kilmės ir net žmonių maistą siekiant padidinti baltymų kiekį7, Maisto kodekso komisija (CAC) ir nacionalinės valdžios institucijos nepatvirtino melamino kaip maisto priedo ir įtraukė jį į pavojingų medžiagų sąrašą prarijus, įkvėpus arba patekus į odą. 2012 m. Pasaulio sveikatos organizacijos (PSO) Tarptautinė vėžio tyrimų agentūra melaminą įtraukė į 2B klasės kancerogenų sąrašą, nes jis gali būti kenksmingas žmonių sveikatai8. Ilgalaikis melamino poveikis gali sukelti vėžį arba inkstų pažeidimus2. Maiste esantis melaminas gali sudaryti kompleksus su cianuro rūgštimi ir sudaryti vandenyje netirpius geltonus kristalus, kurie gali pažeisti inkstų ir šlapimo pūslės audinius, taip pat sukelti šlapimo takų vėžį ir svorio kritimą9,10. Jis gali sukelti ūmų apsinuodijimą maistu, o didelėmis koncentracijomis – mirtį, ypač kūdikiams ir mažiems vaikams.11 Pasaulio sveikatos organizacija (PSO), remdamasi CAC gairėmis, taip pat nustatė leistiną melamino paros normą (TDI) žmonėms – 0,2 mg/kg kūno svorio per parą.12 JAV Maisto ir vaistų administracija (JAV FDA) nustatė didžiausią melamino likučių koncentraciją – 1 mg/kg kūdikių mišiniuose ir 2,5 mg/kg kituose maisto produktuose.2,7 2008 m. rugsėjį buvo pranešta, kad keli vietiniai kūdikių mišinių gamintojai į pieno miltelius įdėjo melamino, kad padidintų baltymų kiekį savo produktuose, dėl to buvo apsinuodijama pieno milteliais ir visoje šalyje išplitęs melamino apsinuodijimo incidentas, nuo kurio susirgo daugiau nei 294 000 vaikų ir daugiau nei 50 000 buvo hospitalizuota.13
Maitinimas krūtimi ne visada įmanomas dėl įvairių veiksnių, tokių kaip miesto gyvenimo sunkumai, motinos ar vaiko ligos, dėl kurių kūdikiams maitinti naudojami mišinukai. Dėl to buvo įkurtos gamyklos, gaminančios kuo panašesnį į motinos pieną sudėtį turinčius kūdikių mišinius14. Rinkoje parduodami kūdikių mišiniai paprastai gaminami iš karvės pieno ir dažniausiai gaminami iš specialaus riebalų, baltymų, angliavandenių, vitaminų, mineralų ir kitų junginių mišinio. Kad mišiniai būtų artimi motinos pienui, mišinio baltymų ir riebalų kiekis skiriasi, o priklausomai nuo pieno rūšies, jie praturtinami tokiais junginiais kaip vitaminai ir mineralai, pavyzdžiui, geležimi15. Kadangi kūdikiai yra jautri grupė ir yra apsinuodijimo rizika, pieno miltelių vartojimo saugumas yra gyvybiškai svarbus sveikatai. Po melamino apsinuodijimo atvejo tarp Kinijos kūdikių viso pasaulio šalys atkreipė ypatingą dėmesį į šią problemą, o šios srities jautrumas taip pat padidėjo. Todėl ypač svarbu sustiprinti kūdikių mišinių gamybos kontrolę, siekiant apsaugoti kūdikių sveikatą. Yra įvairių melamino maisto produktuose aptikimo metodų, įskaitant efektyviąją skysčių chromatografiją (HPLC), elektroforezę, sensorinį metodą, spektrofotometriją ir antigeno-antikūno imunofermentinę analizę16. 2007 m. JAV Maisto ir vaistų administracija (FDA) sukūrė ir paskelbė HPLC metodą melamino ir cianuro rūgšties kiekiui maisto produktuose nustatyti, kuris yra veiksmingiausias melamino kiekio nustatymo metodas17.
Melamino koncentracija kūdikių mišiniuose, išmatuota naudojant naują infraraudonųjų spindulių spektroskopijos metodą, svyravo nuo 0,33 iki 0,96 miligramo kilograme (mg kg-1).18 Šri Lankoje atlikto tyrimo metu nustatyta, kad melamino kiekis nenugriebto pieno milteliuose svyravo nuo 0,39 iki 0,84 mg kg-1. Be to, importuotuose kūdikių mišinių mėginiuose buvo nustatyta didžiausia melamino koncentracija – atitinkamai 0,96 ir 0,94 mg/kg. Ši koncentracija yra mažesnė už nustatytą ribą (1 mg/kg), tačiau vartotojų saugumui užtikrinti reikalinga stebėsenos programa.19
Keliuose tyrimuose buvo tiriamas melamino kiekis Irano kūdikių mišiniuose. Apie 65 % mėginių buvo rasta melamino, vidutiniškai 0,73 mg/kg ir daugiausia 3,63 mg/kg. Kitame tyrime pranešta, kad melamino kiekis kūdikių mišiniuose svyravo nuo 0,35 iki 3,40 μg/kg, vidutiniškai siekdamas 1,38 μg/kg. Apskritai melamino buvimas ir kiekis Irano kūdikių mišiniuose buvo įvertintas įvairiuose tyrimuose, o kai kuriuose mėginiuose melamino kiekis viršijo reguliavimo institucijų nustatytą maksimalią ribą (2,5 mg/kg/pašarui).
Atsižvelgiant į didžiulį tiesioginį ir netiesioginį pieno miltelių suvartojimą maisto pramonėje ir ypatingą kūdikių mišinių svarbą maitinant vaikus, šio tyrimo tikslas buvo patvirtinti melamino aptikimo pieno milteliuose ir kūdikių mišiniuose metodą. Tiesą sakant, pirmasis šio tyrimo tikslas buvo sukurti greitą, paprastą ir tikslų kiekybinį melamino falsifikavimo kūdikių mišiniuose ir pieno milteliuose nustatymo metodą, naudojant efektyviąją skysčių chromatografiją (HPLC) ir ultravioletinių (UV) spindulių aptikimą; antra, šio tyrimo tikslas buvo nustatyti melamino kiekį kūdikių mišiniuose ir pieno milteliuose, parduodamuose Irano rinkoje.
Melamino analizei naudojami prietaisai skiriasi priklausomai nuo maisto gamybos vietos. Melamino likučiams piene ir kūdikių mišiniuose matuoti buvo naudojamas jautrus ir patikimas HPLC-UV analizės metodas. Pieno produktuose yra įvairių baltymų ir riebalų, kurie gali trukdyti melamino matavimui. Todėl, kaip pažymėjo Sun ir kt. 22, prieš instrumentinę analizę būtina taikyti tinkamą ir veiksmingą valymo strategiją. Šiame tyrime naudojome vienkartinius švirkštų filtrus. Šiame tyrime melaminui kūdikių mišiniuose ir pieno milteliuose atskirti naudojome C18 kolonėlę. 1 paveiksle parodyta melamino aptikimo chromatograma. Be to, mėginių, kuriuose buvo 0,1–1,2 mg/kg melamino, išgava svyravo nuo 95 % iki 109 %, regresijos lygtis buvo y = 1,2487x − 0,005 (r = 0,9925), o santykinio standartinio nuokrypio (RSD) vertės svyravo nuo 0,8 iki 2 %. Turimi duomenys rodo, kad metodas yra patikimas tiriamame koncentracijos diapazone (1 lentelė). Melamino instrumentinė aptikimo riba (LOD) ir kiekybinio nustatymo riba (LOQ) buvo atitinkamai 1 μg ml−1 ir 3 μg ml−1. Be to, melamino UV spektre buvo matoma absorbcijos juosta ties 242 nm. Aptikimo metodas yra jautrus, patikimas ir tikslus. Šis metodas gali būti naudojamas įprastam melamino kiekio nustatymui.
Panašius rezultatus paskelbė keli autoriai. Pieno produktuose esančiam melaminui analizuoti buvo sukurtas efektyviosios skysčių chromatografijos ir fotodiodų gardelės (HPLC) metodas. Apatinės kiekybinio nustatymo ribos buvo 340 μg kg−1 pieno milteliams ir 280 μg kg−1 kūdikių mišiniams, esant 240 nm bangos ilgiui. Filazzi ir kt. (2012) pranešė, kad HPLC metodu kūdikių mišiniuose melamino aptikta nebuvo. Tačiau 8 % pieno miltelių mėginių melamino kiekis buvo 0,505–0,86 mg/kg. Tittlemiet ir kt.23 atliko panašų tyrimą ir efektyviosios skysčių chromatografijos ir masių spektrometrijos / MS (HPLC-MS/MS) metodu nustatė, kad kūdikių mišiniuose (mėginio numeris: 72) melamino kiekis yra maždaug 0,0431–0,346 mg kg−1. Venkatasamy ir kt. atliktame tyrime... (2010) melamino kiekiui kūdikių mišiniuose ir piene įvertinti buvo naudojamas žaliosios chemijos metodas (be acetonitrilo) ir atvirkštinės fazės efektyviosios skysčių chromatografija (RP-HPLC). Mėginio koncentracijos diapazonas svyravo nuo 1,0 iki 80 g/ml, o atsakas buvo tiesinis (r > 0,999). Metodas parodė 97,2–101,2 atgavimą, kai koncentracijos diapazonas buvo 5–40 g/ml, o pakartojamumas buvo mažesnis nei 1,0 % santykinis standartinis nuokrypis. Be to, stebėta LOD ir LOQ buvo atitinkamai 0,1 g mL−1 ir 0,2 g mL−124. Lutter ir kt. (2011) nustatė melamino užterštumą karvės piene ir pieno pagrindu pagamintame kūdikių mišinyje, naudodami HPLC-UV. Melamino koncentracijos svyravo nuo < 0,2 iki 2,52 mg kg−1. HPLC-UV metodo linijinis dinaminis diapazonas buvo nuo 0,05 iki 2,5 mg kg−1 karvės pienui, nuo 0,13 iki 6,25 mg kg−1 kūdikių mišiniams, kurių baltymų masės dalis yra <15 %, ir nuo 0,25 iki 12,5 mg kg−1 kūdikių mišiniams, kurių baltymų masės dalis yra 15 %. LOD (ir LOQ) rezultatai buvo 0,03 mg kg−1 (0,09 mg kg−1) karvės pienui, 0,06 mg kg−1 (0,18 mg kg−1) kūdikių mišiniams, kurių baltymų yra <15 %, ir 0,12 mg kg−1 (0,36 mg kg−1) kūdikių mišiniams, kurių baltymų yra 15 %, o signalo ir triukšmo santykis LOD ir LOQ buvo atitinkamai 3 ir 1025. Diebes ir kt. (2012) tyrė melamino kiekį kūdikių mišinių ir pieno miltelių mėginiuose, naudodami HPLC/DMD. Kūdikių mišiniuose mažiausias ir didžiausias kiekis buvo atitinkamai 9,49 mg kg−1 ir 258 mg kg−1. Aptikimo riba (LOD) buvo 0,05 mg kg−1.
Javaid ir kt. pranešė, kad melamino likučių kūdikių mišiniuose kiekis, nustatytas Furjė transformacijos infraraudonųjų spindulių spektroskopijos (FT-MIR) metodu, buvo 0,002–2 mg kg−1 intervale (LOD = 1 mg kg−1; LOQ = 3,5 mg kg−1). Rezai ir kt.27 pasiūlė HPLC-DDA (λ = 220 nm) metodą melaminui įvertinti ir pasiekė 0,08 μg ml−1 LOQ pieno milteliams, kuri buvo mažesnė nei šiame tyrime gautas lygis. Sun ir kt. sukūrė RP-HPLC-DAD melamino aptikimui skystame piene kietosios fazės ekstrakcijos (SPE) būdu. Jie gavo atitinkamai 18 ir 60 μg kg−128 LOD ir LOQ, kurios yra jautresnės nei dabartinis tyrimas. Montesano ir kt. patvirtino HPLC-DMD metodo veiksmingumą vertinant melamino kiekį baltymų papilduose, kurio kiekybinio nustatymo riba yra 0,05–3 mg/kg, o šis metodas buvo mažiau jautrus nei šiame tyrime naudotas metodas29.
Be jokios abejonės, analitinės laboratorijos atlieka svarbų vaidmenį saugant aplinką, stebėdamos teršalus įvairiuose mėginiuose. Tačiau analizės metu naudojant daug reagentų ir tirpiklių gali susidaryti pavojingų likučių. Todėl 2000 m. buvo sukurta žalioji analitinė chemija (GAC), siekiant sumažinti arba pašalinti neigiamą analitinių procedūrų poveikį operatoriams ir aplinkai26. Melaminui identifikuoti buvo naudojami tradiciniai melamino aptikimo metodai, įskaitant chromatografiją, elektroforezę, kapiliarinę elektroforezę ir imunofermentinę analizę (ELISA). Tačiau tarp daugybės aptikimo metodų elektrocheminiai jutikliai sulaukė daug dėmesio dėl savo puikaus jautrumo, selektyvumo, greito analizės laiko ir patogių naudoti savybių30,31. Žalioji nanotechnologija naudoja biologinius kelius nanomedžiagoms sintetinti, o tai gali sumažinti pavojingų atliekų susidarymą ir energijos suvartojimą, taip skatinant tvarios praktikos įgyvendinimą. Pavyzdžiui, iš aplinkai nekenksmingų medžiagų pagaminti nanokompozitai gali būti naudojami biosensoriuose tokioms medžiagoms kaip melaminas aptikti32,33,34.
Tyrimas rodo, kad kietosios fazės mikroekstrakcija (SPME) yra efektyviai naudojama dėl didesnio energijos vartojimo efektyvumo ir tvarumo, palyginti su tradiciniais ekstrahavimo metodais. SPME ekologiškumas ir energijos vartojimo efektyvumas daro ją puikia alternatyva tradiciniams ekstrahavimo metodams analizinėje chemijoje ir suteikia tvaresnį bei efektyvesnį mėginių paruošimo būdą35.
2013 m. Wu ir kt. sukūrė labai jautrų ir selektyvų paviršiaus plazmonų rezonanso (mini-SPR) biosensorių, kuris naudoja melamino ir anti-melamino antikūnų sąveiką, kad greitai aptiktų melaminą kūdikių mišiniuose naudojant imunologinį tyrimą. SPR biosensorius kartu su imunologiniu tyrimu (naudojant melaminu konjuguotą galvijų serumo albuminą) yra paprasta naudoti ir nebrangi technologija, kurios aptikimo riba yra tik 0,02 μg/ml.
Nasiri ir Abbasian naudojo didelio potencialo nešiojamąjį jutiklį kartu su grafeno oksido ir chitozano kompozitais (GOCS), kad aptiktų melaminą komerciniuose mėginiuose37. Šis metodas pasižymėjo itin dideliu selektyvumu, tikslumu ir atsaku. GOCS jutiklis pasižymėjo puikiu jautrumu (239,1 μM−1), tiesiniu diapazonu nuo 0,01 iki 200 μM, giminingumo konstanta 1,73 × 104 ir LOD iki 10 nM. Be to, Chandrasekhar ir kt. 2024 m. atliktame tyrime buvo pasirinktas ekologiškas ir ekonomiškas metodas. Jie naudojo papajų žievelių ekstraktą kaip reduktorių cinko oksido nanodalelėms (ZnO-NP) sintetinti ekologišku metodu. Vėliau buvo sukurtas unikalus mikro-Ramano spektroskopijos metodas melamino kiekiui kūdikių mišiniuose nustatyti. Iš žemės ūkio atliekų gautos ZnO-NP parodė potencialą kaip vertinga diagnostikos priemonė ir patikima, nebrangi technologija melaminui stebėti ir aptikti38.
Alizadeh ir kt. (2024) naudojo labai jautrią metalo-organinio karkaso (MOF) fluorescencijos platformą melamino kiekiui pieno milteliuose nustatyti. Jutiklio linijinis diapazonas ir apatinė aptikimo riba, nustatyti naudojant 3σ/S, buvo atitinkamai nuo 40 iki 396,45 nM (atitinka nuo 25 μg kg−1 iki 0,25 mg kg−1) ir 40 nM (atitinka 25 μg kg−1). Šis diapazonas yra gerokai mažesnis už didžiausią leidžiamąją liekanų koncentraciją (MRL), nustatytą melamino identifikavimui kūdikių mišiniuose (1 mg kg−1) ir kituose maisto / pašarų mėginiuose (2,5 mg kg−1). Fluorescencinis jutiklis (terbis (Tb)@NH2-MIL-253(Al)MOF) parodė didesnį tikslumą ir tikslesnę matavimo galimybę nei HPLC39, nustatant melaminą pieno milteliuose. Žaliosios chemijos biosensoriai ir nanokompozitai ne tik pagerina aptikimo galimybes, bet ir sumažina pavojų aplinkai, laikydamiesi tvaraus vystymosi principų.
Žaliosios chemijos principai buvo taikomi įvairiems melamino nustatymo metodams. Vienas iš būdų – sukurti žaliosios dispersinės kietosios fazės mikroekstrahavimo metodą, naudojant natūralų poliarinį polimerą β-ciklodekstriną, susietą su citrinos rūgštimi, siekiant efektyviai ekstrahuoti melaminą 40 iš tokių mėginių kaip kūdikių mišiniai ir karštas vanduo. Kitas metodas – Mannicho reakcija melamino nustatymui pieno mėginiuose. Šis metodas yra nebrangus, ekologiškas ir labai tikslus, o jo tiesinis diapazonas yra 0,1–2,5 ppm, o aptikimo riba – žema 41. Be to, naudojant Furjė transformacijos infraraudonųjų spindulių perdavimo spektroskopiją, pasižyminčią dideliu tikslumu ir atitinkamai 1 ppm ir 3,5 ppm aptikimo ribomis 42, buvo sukurtas ekonomiškas ir ekologiškas melamino kiekybinio nustatymo skystame piene ir kūdikių mišiniuose metodas.
Keliuose tyrimuose buvo pasiūlyti novatoriški melamino aptikimo metodai, tokie kaip kietosios fazės ekstrakcija ir efektyvioji skysčių chromatografija (HPLC)43, taip pat greitoji efektyvioji skysčių chromatografija (HPLC), kuriai nereikia sudėtingo išankstinio apdorojimo ar jonų porų reagentų, taip sumažinant cheminių atliekų kiekį44. Šie metodai ne tik suteikia tikslius melamino nustatymo pieno produktuose rezultatus, bet ir atitinka žaliosios chemijos principus, sumažinant pavojingų cheminių medžiagų naudojimą ir bendrą analitinio proceso poveikį aplinkai.
Keturiasdešimt skirtingų prekių ženklų mėginių buvo ištirti trimis egzemplioriais, o rezultatai pateikti 2 lentelėje. Melamino kiekis kūdikių mišinių ir pieno miltelių mėginiuose svyravo atitinkamai nuo 0,001 iki 0,004 mg/kg ir nuo 0,001 iki 0,095 mg/kg. Reikšmingų pokyčių tarp trijų kūdikių mišinių amžiaus grupių nepastebėta. Be to, melamino aptikta 80 % pieno miltelių, tačiau 65 % kūdikių mišinių buvo užteršti melaminu.
Pramoniniuose pieno milteliuose melamino kiekis buvo didesnis nei kūdikių mišiniuose, ir skirtumas buvo statistiškai reikšmingas (p < 0,05) (2 pav.).
Gauti rezultatai buvo mažesni už FDA nustatytas ribas (mažesnės nei 1 ir 2,5 mg/kg). Be to, rezultatai atitinka CAC (2010 m.) ir ES nustatytas ribas45,46, t. y. didžiausia leidžiama riba kūdikių mišiniams yra 1 mg kg-1, o pieno produktams – 2,5 mg kg-1.
Remiantis 2023 m. Ghanati ir kt. atliktu tyrimu47, melamino kiekis skirtingų rūšių supakuotame piene Irane svyravo nuo 50,7 iki 790 μg kg−1. Jų rezultatai buvo mažesni už FDA leistiną ribą. Mūsų rezultatai yra mažesni nei Shoder ir kt.48 ir Rima ir kt.49. Shoder ir kt. (2010) nustatė, kad ELISA metodu nustatytas melamino kiekis pieno milteliuose (n = 49) svyravo nuo 0,5 iki 5,5 mg/kg. Rima ir kt. analizavo melamino likučius pieno milteliuose fluorescencine spektrofotometrija ir nustatė, kad melamino kiekis pieno milteliuose buvo 0,72–5,76 mg/kg. 2011 m. Kanadoje buvo atliktas tyrimas, kurio metu buvo stebimas melamino kiekis kūdikių mišiniuose (n = 94) naudojant skysčių chromatografiją (LC/MS). Nustatyta, kad melamino koncentracijos yra mažesnės už leistiną ribą (preliminarus standartas: 0,5 mg kg−1). Mažai tikėtina, kad sukčiavimo būdu nustatytas melamino kiekis buvo taktika, naudojama baltymų kiekiui padidinti. Tačiau to negalima paaiškinti trąšų naudojimu, konteinerių turinio perkėlimu ar panašiais veiksniais. Be to, nebuvo atskleista į Kanadą importuojamų pieno miltelių melamino kilmė50.
Hassani ir kt. 2013 m. Irano rinkoje išmatavo melamino kiekį pieno milteliuose ir skystame piene ir gavo panašius rezultatus. Rezultatai parodė, kad, išskyrus vieną pieno miltelių ir skysto pieno prekės ženklą, visi kiti mėginiai buvo užteršti melaminu – pieno milteliuose jo kiekis svyravo nuo 1,50 iki 30,32 μg g−1, o piene – nuo ​​0,11 iki 1,48 μg ml−1. Pažymėtina, kad nė viename mėginyje nebuvo aptikta cianuro rūgšties, todėl sumažėjo vartotojų apsinuodijimo melaminu tikimybė.51 Ankstesni tyrimai vertino melamino koncentraciją šokolado gaminiuose, kurių sudėtyje yra pieno miltelių. Apie 94 % importuotų mėginių ir 77 % Irano mėginių buvo rasta melamino. Melamino kiekis importuotuose mėginiuose svyravo nuo 0,032 iki 2,692 mg/kg, o Irano mėginiuose – nuo ​​0,013 iki 2,600 mg/kg. Iš viso melamino buvo aptikta 85 % mėginių, tačiau tik vieno konkretaus prekės ženklo produktuose jo kiekis viršijo leistiną ribą.44 Tittlemier ir kt. pranešė, kad melamino kiekis pieno milteliuose svyravo nuo 0,00528 iki 0,0122 mg/kg.
3 lentelėje apibendrinti rizikos vertinimo rezultatai trijose amžiaus grupėse. Visose amžiaus grupėse rizika buvo mažesnė nei 1. Taigi, nėra jokios nekancerogeninės rizikos sveikatai dėl melamino kūdikių mišiniuose.
Mažesnis pieno produktų užterštumo lygis gali būti dėl netyčinio užteršimo paruošimo metu, o didesnis – dėl tyčinių priedų. Be to, bendra rizika žmonių sveikatai vartojant pieno produktus, kuriuose yra mažas melamino kiekis, laikoma maža. Galima daryti išvadą, kad produktų, kuriuose yra toks mažas melamino kiekis, vartojimas nekelia jokio pavojaus vartotojų sveikatai52.
Atsižvelgiant į maisto saugos valdymo svarbą pieno pramonėje, ypač visuomenės sveikatos apsaugos požiūriu, nepaprastai svarbu sukurti ir patvirtinti melamino kiekio ir likučių pieno milteliuose ir kūdikių mišiniuose vertinimo ir palyginimo metodą. Buvo sukurtas paprastas ir tikslus HPLC-UV spektrofotometrinis metodas melamino kiekiui kūdikių mišiniuose ir pieno milteliuose nustatyti. Metodas buvo patvirtintas siekiant užtikrinti jo patikimumą ir tikslumą. Nustatyta, kad metodo aptikimo ir kiekybinio nustatymo ribos yra pakankamai jautrios, kad būtų galima išmatuoti melamino kiekį kūdikių mišiniuose ir pieno milteliuose. Remiantis mūsų duomenimis, melaminas buvo aptiktas daugumoje Irano mėginių. Visi aptikti melamino kiekiai buvo mažesni už CAC nustatytas didžiausias leistinas ribas, o tai rodo, kad šių rūšių pieno produktų vartojimas nekelia pavojaus žmonių sveikatai.
Visi naudoti cheminiai reagentai buvo analitinės kokybės: 99 % grynumo melaminas (2,4,6-triamino-1,3,5-triazinas) („Sigma-Aldrich“, Sent Luisas, Misūris); HPLC klasės acetonitrilas („Merck“, Darmštatas, Vokietija); itin grynas vanduo („Millipore“, Morfheimas, Prancūzija). Vienkartiniai švirkštų filtrai („Chromafil Xtra PVDF-45/25“, porų dydis 0,45 μm, membranos skersmuo 25 mm) („Macherey-Nagel“, Düren, Vokietija).
Mėginiams paruošti buvo naudojama ultragarsinė vonia („Elma“, Vokietija), centrifuga („Beckman Coulter“, Krefeldas, Vokietija) ir HPLC (KNAUER, Vokietija).
Buvo naudojamas didelio efektyvumo skysčių chromatografas (KNAUER, Vokietija) su UV detektoriumi. HPLC analizės sąlygos buvo tokios: buvo naudojama UHPLC Ultimate sistema su ODS-3 C18 analitine kolonėle (4,6 mm × 250 mm, dalelių dydis 5 μm) (MZ, Vokietija). HPLC eliuentas (mobilioji fazė) buvo TFA/metanolio mišinys (450:50 ml), kurio srautas buvo 1 ml min-1. Detekcijos bangos ilgis buvo 242 nm. Įpurškimo tūris buvo 100 μl, kolonėlės temperatūra buvo 20 °C. Kadangi vaisto sulaikymo laikas yra ilgas (15 minučių), kitą injekciją reikia atlikti po 25 minučių. Melaminas buvo identifikuotas palyginus melamino standartų sulaikymo laiką ir UV spektro smailę.
Standartinis melamino tirpalas (10 μg/ml) buvo paruoštas naudojant vandenį ir laikomas šaldytuve (4 °C) toliau nuo šviesos. Praskiestas tirpalas su mobiliąja faze ir paruošti darbiniai standartiniai tirpalai. Kiekvienas standartinis tirpalas buvo įpurškiamas į HPLC chromatografą 7 kartus. Kalibravimo lygtis 10 buvo apskaičiuota atliekant nustatyto smailės ploto ir nustatytos koncentracijos regresinę analizę.
Komerciniai karvės pieno milteliai (20 mėginių) ir skirtingų prekių ženklų karvės pieno pagrindo kūdikių mišinių mėginiai (20 mėginių) buvo įsigyti iš vietinių prekybos centrų ir vaistinių Irane, skirti skirtingo amžiaus kūdikiams (0–6 mėnesių, 6–12 mėnesių ir >12 mėnesių) maitinti, ir laikomi šaldytuve (4 °C) iki analizės. Tada pasverta 1 ± 0,01 g homogenizuotų pieno miltelių ir sumaišyta su acetonitrilo ir vandens mišiniu (50:50, v/v; 5 ml). Mišinys maišomas 1 min., po to 30 min. sonikuojamas ultragarso vonelėje ir galiausiai 1 min. purtomas. Mišinys centrifuguojamas 9000 × g greičiu 10 min. kambario temperatūroje, o supernatantas filtruojamas į 2 ml automatinio mėginių ėmimo buteliuką naudojant 0,45 μm švirkšto filtrą. Filtratas (250 μl) buvo sumaišytas su vandeniu (750 μl) ir įpurškiamas į HPLC sistemą10,42.
Siekdami patvirtinti metodą, nustatėme atgavimą, tikslumą, aptikimo ribą (LOD), kiekybinio nustatymo ribą (LOQ) ir preciziškumą optimaliomis sąlygomis. LOD buvo apibrėžta kaip mėginio kiekis, kurio smailės aukštis yra tris kartus didesnis už bazinį triukšmo lygį. Kita vertus, mėginio kiekis, kurio smailės aukštis yra 10 kartų didesnis už signalo ir triukšmo santykį, buvo apibrėžtas kaip LOQ.
Prietaiso atsakas buvo nustatytas naudojant kalibravimo kreivę, sudarytą iš septynių duomenų taškų. Buvo naudojami skirtingi melamino kiekiai (0, 0,2, 0,3, 0,5, 0,8, 1 ir 1,2). Buvo nustatytas melamino skaičiavimo procedūros tiesiškumas. Be to, į tuščiuosius mėginius buvo įlašinta keletas skirtingų melamino lygių. Kalibravimo kreivė buvo sudaryta nuolat įpurškiant 0,1–1,2 μg/ml standartinio melamino tirpalo į kūdikių mišinių ir pieno miltelių mėginius, o jos R2 = 0,9925. Tikslumas buvo įvertintas pagal procedūros pakartojamumą ir atkuriamumą ir buvo pasiektas įpurškiant mėginius pirmą ir tris vėlesnes dienas (tris kartus). Metodo pakartojamumas buvo įvertintas apskaičiuojant RSD % trims skirtingoms pridėto melamino koncentracijoms. Siekiant nustatyti tikslumą, buvo atlikti išgavos tyrimai. Išgavos laipsnis ekstrakcijos metodu buvo apskaičiuotas esant trims melamino koncentracijos lygiams (0,1, 1,2, 2) kūdikių mišinių ir pieno miltelių mėginiuose9,11,15.
Apskaičiuota paros norma (EDI) buvo nustatyta pagal šią formulę: EDI = Ci × Cc/BW.
Kur Ci yra vidutinis melamino kiekis, Cc yra pieno suvartojimas, o BW yra vidutinis vaikų svoris.
Duomenų analizė atlikta naudojant SPSS 24. Normalumas buvo patikrintas naudojant Kolmogorovo-Smirnovo testą; visi duomenys buvo neparametriniai testai (p = 0). Todėl reikšmingiems skirtumams tarp grupių nustatyti buvo naudojamas Kruskalo-Wallis ir Manno-Whitney testas.
Ingelfinger, Jr. Melaminas ir jo poveikis pasaulinei maisto taršai. „New England Journal of Medicine“ 359(26), 2745–2748 (2008).
Lynch, RA ir kt. pH įtaka melamino migracijai vaikų dubenėliuose. Tarptautinis maisto užterštumo žurnalas, 2, 1–8 (2015).
Barrett, MP ir Gilbert, IH. Toksiškų junginių nukreipimas į tripanosomų vidų. „Progress in Parasitology“ 63, 125–183 (2006).
Nirman, MF ir kt. Melamino dendrimerų, kaip vaistų tiekimo priemonių, įvertinimas in vitro ir in vivo. Tarptautinis vaistinių vaistų žurnalas, 281(1–2), 129–132(2004).
Pasaulio sveikatos organizacija. 1–4 ekspertų susitikimai, skirti melamino ir cianuro rūgšties toksikologiniams aspektams peržiūrėti (2008 m.).
Howe, AK-C., Kwan, TH ir Lee, PK-T. Melamino toksiškumas ir inkstai. Amerikos nefrologijos draugijos žurnalas 20(2), 245–250 (2009).
Ozturk, S. ir Demir, N. Naujo IMAC adsorbento, skirto melamino identifikavimui pieno produktuose, sukūrimas naudojant efektyviąją skysčių chromatografiją (HPLC). „Journal of Food Synthesis and Analysis“ 100, 103931 (2021).
Chansuvarn, V., Panic, S. ir Imim, A. Paprastas spektrofotometrinis melamino nustatymas skystame piene, remiantis Mannicho žaliojo reakcija. Spectrochem. Acta Part A Mol. Biomol. Spectrosc. 113, 154–158 (2013).
Deabes, M. ir El-Habib, R. Melamino nustatymas kūdikių mišiniuose, pieno milteliuose ir pangasijų mėginiuose HPLC/diodų gardelės chromatografijos metodu. „Journal of Environmental Analytical Toxicology“, 2(137), 2161–0525.1000137 (2012).
Skinner, KG, Thomas, JD ir Osterloh, JD. Melamino toksiškumas. Medicininės toksikologijos žurnalas, 6, 50–55 (2010).
Pasaulio sveikatos organizacija (PSO), Melamino ir cianuro rūgšties toksikologija ir sveikatos aspektai: PSO ir FAO bendradarbiavimo ekspertų susitikimo, kurį rėmė Kanados sveikatos departamentas, Otavoje, Kanadoje, 2008 m. gruodžio 1–4 d., ataskaita (2009 m.).
Korma, SA ir kt. Kūdikių mišinių miltelių, kurių sudėtyje yra naujų funkcinių struktūrinių lipidų, ir komercinio kūdikių mišinio lipidų sudėties ir kokybės lyginamasis tyrimas. European Food Research and Technology 246, 2569–2586 (2020).
El-Waseef, M. ir Hashem, H. Kūdikių mišinių maistinės vertės, kokybės savybių ir galiojimo laiko gerinimas naudojant palmių aliejų. „Middle East Journal of Agricultural Research“ 6, 274–281 (2017).
Yin, W. ir kt. Monokloninių antikūnų prieš melaminą gamyba ir netiesioginio konkurencinio ELISA metodo, skirto melamino aptikimui žaliame piene, pieno milteliuose ir gyvūnų pašaruose, sukūrimas. Žemės ūkio ir maisto chemijos žurnalas 58(14), 8152–8157 (2010).